扩增产物的检测1．1.5%琼脂糖凝胶电泳检测：取10ulPCR扩增物作1.5%琼脂糖凝胶电泳、0.5μg/ml溴化乙锭染色，以PGEM-3ZfDNA-HaeⅢ为分子量标准，置紫外透射仪观察结果。
UU1：CAGATACATTAAACGAAGCAGGUU2：GTGGTGACATACCATTAACPCR扩增传统的方法为的反应体积为100μl，含5x反应缓冲液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4种dNTP各200μmol/L以及引物对各25pmol/L。上述成分预先一次性分装于0.5ml离心管，-20℃备用。临用加模板DNA2μl，短暂离心，加100μl矿物油覆盖。现在试剂已商品化，反应体积为25μl，单管已分装好，只要加入模板DNA即可。置DNA扩增仪进行40次循环扩增。每次循环包括90℃变性45s，55℃退火30s和72℃延伸40s三个步骤。每次扩增均应作阴阳性对照。引物设计引物来源于解脲脲原体，脲酶基因序列：将宫颈管内或尿道内刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20，1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES缓冲液，置37℃裂解60min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉淀，沉淀物溶于20μlTE缓冲液。2．解脲脲原体DNA提取：标本处理1．取材部位为子宫颈管，男性为尿道，将灭菌白金耳深入宫颈管或尿道1cm左右，转动数圈，停留约30s，取出后置标本缓冲液中。3．基因诊断：利用DNA探针对支原体诊断其敏感性稍差，但特异性高，用聚合酶链反应，敏感性、特异性均高。具体检测方面如下：血清学诊断试验：酶联免疫吸附试验敏感性高：微量免疫荧光法具有快速特点。2．血清学鉴定法：最常用的是琼脂扩散法，即将支原体接种到琼脂皿上。然后再用浸过适量血清的滤纸放到琼脂表面，观察哪一种能抑制支原体生长。也可用琼脂表面的菌落作荧光抗体染色法，用落射荧光显微镜观察，此法的优点是可以利用最初生长在琼脂表面上的菌落而不必将支原体传代。b．常用培养基为牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鲜酵母浸液，10-20%动物血清及0.5%氯化钠，还可加葡萄糖和精氨酸以促进MH和MG生长，加入尿素以供UU代谢，适量加青霉素抑制杂菌。a．采集标本，一般为泌尿生殖试子或刷片，少数取前列腺液，精液、关节液，或取输卵管，直肠活检物，近年来用初段尿标本离心物，以取代尿道拭子。拭子取材时，将拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。该方法容易造成尿道损伤及继发感染。用时须慎重。女性则需先清洁宫颈鳞状与柱状上皮结合部，用细胞刷收集宫颈标本，能增加感染细胞的数量，较棉拭子敏感性高。1．支原体培养：子宫内膜炎诊断实验诊断支原体感染的实验室诊断主要是支原体的培养和血清学鉴定，目前主要采用基因诊断。六、子宫内膜炎诊断及鉴别诊断子宫内膜炎诊断临床诊断有不洁性交史，有尿道、阴道分泌物及排尿灼痛表现者而又排除其他病原体感染的可能性，取尿道或宫颈分泌物涂片，在1000倍显微镜下可见多形核白细胞≥5个，可作初步诊断。支原体感染常见的合并症为输卵管炎，少数患者可出现子宫内膜炎及盆腔炎。女性患者多见以子宫颈为中心扩散的生殖系炎症。多数无明显自觉症状，少数重症病人有阴道坠感，当感染扩及尿道时，尿频、尿急是引起病人注意的主要症状。感染局限在子宫颈，表现为白带增多、混浊、子宫颈水肿、充血或表面糜烂。感染扩及尿道表现为尿道口潮红、充血、挤压尿道可有少量分泌物外溢，但很少有压痛出现。亚急性期常合并前列腺感染，患者常出现会阴部胀痛、腰酸、双股内侧不适感或在做提肛动作时有自会阴向股内侧发散的刺痛感。肛诊时前列腺纵沟不明显或表面类似核桃壳凹凸不平，少数病例B型超声波诊断可证实不同程度的增大。合并副睾炎者不多见。
